Определение резус-фактора крови: как узнать его экспресс-методом

Определение группы эритроцитарных антигенов и резус-фактора давно стало одним из обязательных исследований для большинства пациентов, поступающих на стационарное лечение. Его проведение возможно на любом уровне оказания медицинской помощи при условии наличия необходимых реагентов и инструментов.

Что это такое?

Цоликлон – моноклональное антитело, образующееся путем генной инженерии. Чаще всего, для его получения используют мышей – животному вводят специальный антиген, а после получают асцитную жидкость грызуна, в которой и содержатся указанные антитела.

Морфологически, они относятся к иммуноглобулинам класса М, т.е. антителам острой фазы. Механизм действия их обусловлен образованием комплекса антиген-антитело, где в качестве антигена выступают некоторые молекулы (в данной ситуации – белки, определяющие группу крови и ее резус), расположенные на мембране клетки.

Какие существуют препараты цоликлонов?

Что это такое?

В настоящее время, в лабораторной диагностике используется 3 типа стандартных цоликлонов – анти-А, анти-В и анти-АВ. Каждый из них вступает в реакцию со специфичным для него антигеном, обуславливая развитие иммунной реакции.

Эти препараты выпускаются в виде ампул или флаконов, содержащих 5 или 10 мл раствора антител. Все они имеют специфическую окраску, по которой и проводится определение каждого типа:

  • анти-А окрашен в красный цвет;
  • анти-В выпускается в виде раствора синего цвета;
  • комбинированный цоликлон анти-АВ (или анти-D) специфической окраски не имеет.

Цоликлон анти-АВ может быть модифицированным и использоваться для определения резус фактора.

Методика исследования

Алгоритм исследования достаточно прост, специальной подготовки к исследованию от пациента не требуется.

Что это такое?

Определение группы может проводиться в нативной крови как с использованием консерванта, так и без него. Для исследования берут капиллярную кровь из пальца пациента.

Обязательно соблюдать условия окружающей среды для получения достоверной информации: анализ проводится в хорошо освещенном помещении с умеренной влажностью и температурой не ниже 20 градусов.

Кроме того, следует удостовериться, что кровь была взята у пациента правильно, а срок годности используемых реагентов еще не истек.

На специальную пластину (или планшетку), на расстоянии друг от друга с помощью специальной пипетки наносят по 1 крупной капле каждого из антител (для удобства, лучше располагать их так – А, В, АВ). Возле каждой из капель цоликлонов необходимо поместить по одной капле исследуемой крови и при покачивании планшетки постепенно их перемешать.

Визуально, результаты исследования можно определить уже через 5-10 секунд после начала анализа. В исследуемой крови обнаруживаются так называемые “красные конгломераты” – склеившиеся эритроциты.

Образуются они в результате реакции агглютинации, т.е. в том случае, когда цоликлон соответствует антигену (в том числе и при исследовании на резус-фактор).

Что это такое?

Если же агглютинации не наблюдается, то соответственно имеется расхождение между исследуемыми антигенами и имеющимися антителами.

Шаг 3. Происходит реакция слипания эритроцитов

Интерпретация результатов

Как проводится оценка результатов исследования и определение групповой принадлежности?

Как уже говорилось выше, результат исследования определяется по наличию реакции агглютинации визуально или с помощью анализаторов:

  • если ее нет ни в одной из капель, значит исследуемая кровь имеет первую группу.
  • когда она наблюдается в ячейке, где расположен цоликлон анти-А, значит в исследуемой крови содержится данный антиген. Таким образом, исследуемая кровь может быть как второй (генотип АА или А0) или 4 (АВ) групп.
  • если агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-В, то исследуемая кровь 3 (ВВ, В0) или 4 группы.
Что это такое?

Шаг 4. Определение группы крови

Для проверки правильности результатов на планшетке и добавляется цоликлон анти-АВ (обладающий свойством определять и резус-фактор). Он, в какой-то мере является контрольным, так как именно по наличию в нем агглютинатов судят о правильности проведенного анализа. Если реакция произошла во всех ячейках, значит исследуемый образец относится к 4 группе крови.

Читайте также:  Варикозное расширение вен кишечника симптомы и лечение

Возможна ситуация, когда агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-АВ, а в других образцах ее нет. В таком случае можно говорить о неправильно проведенном анализе, и проводят повторное определение группы и резус-фактора.

Правила тестирования

Исследование крови необходимо проводить в помещении не выше 25 градусов. Очень важно, чтобы все реагенты были плотно закрыты, так как если цоликлоны высыхают, их активность сильно снижается.

Такое тестирование на определение групп крови очень часто назначают для стационарных больных, достаточно иметь необходимые инструменты и реагенты. Медики проверяют кровь на ее групповую причастность с использованием распространенных сывороток, однако цоликлонам отдают большее предпочтение, так как такой способ является быстрым и эффективным.

Антитела цоликлоны считаются иммуноглобулином, иначе говоря, являются антителами острой фазы.

На сегодняшний день широкое применение получили антитела в крови А, В, АВ. Благодаря реакции с антигеном они образуют развитие реакции иммунной.

Группы крови по системе АВи системе резус-фактор

Как уже говорили, выделяют 4 группы крови по системе АВ0. С учетом наличия или отсутствия резус-фактора каждая из этих групп в свою очередь делится на 2: “резус положительную” и “резус отрицательную”.

Приводим описание группы крови человека с учетом системы АВ0 и резус-фактора.

0 (I) — первая группа крови:

  • описание первой группы крови при наличии резус-фактора — “0 (I) положительная”;
  • описание первой группы крови при отсутствии резус-фактора — “0(I) отрицательная”.

А (II) — вторая группа крови:

  • описание второй группы крови при наличии резус-фактора — “А (II) положительная”;
  • описание второй группы крови при отсутствии резус-фактора — “A(II) отрицательная”.

В (III) — третья группа крови:

  • описание третьей группы крови при наличии резус-фактора — “B (III) положительная”;
  • описание третьей группы крови при отсутствии резус-фактора — “B(III) отрицательная”.

АВ (IV) — четвертая группа крови:

  • описание четвертой группы крови при наличии резус-фактора — “AB (IV) положительная”;
  • описание четвертой группы крови при отсутствии резус-фактора — “AB(IV) отрицательная”.

Проведение процедуры

Проводить процедуру определения группы крови цоликлонами, алгоритм которой описан ниже, принято в лабораторных условиях. Это связано с тем, что хранение препаратов и компонентов требует особых условий, которых невозможно достичь в быту.

Процедура проводится с соблюдением некоторых условий:

  • температура в помещении должна быть в пределах от 15-25 градусов,
  • каждый отдельный реагент должен храниться в плотно закрытой емкости,
  • лаборатория должна быть хорошо освещена,
  • если реагент для проведения процедуры помутнел, он непригоден,
  • если в нем наличествует осадок, применять препарат нельзя.

Чтобы благодаря этому анализу получить достоверные сведения, необходимо тщательно к ней подготовиться.

Подготовительные меры

Проведение процедуры

Перед тем как начать определение группы крови с помощью цоликлонов, нужно заранее приготовить все необходимые инструменты, реагенты и биоматериал. Важно соблюсти все условия процедуры. Только так можно рассчитывать на получение достоверных сведений.

Определение группы крови по цоликлонам проводится, если есть такое оснащение:

  • сухой планшет, тарелка или предметное стекло для проведения подобных манипуляций,
  • цоликлоны анти-А и анти-В,
  • две стерильные пипетки для разных цоликлонов,
  • две стеклянные палочки,
  • стерильный шприц для забора биоматериала,
  • несколько ватных тампонов,
  • стерильные салфетки,
  • спирт,
  • жгут,
  • физраствор.

На сухой пробирке должна быть отметка с фамилией исследуемого пациента. Бланк, который выдан врачом, должен быть правильно заполнен лаборантом. В нем должно быть описание о группе, резус факторе. Внизу ставят печать и подпись врача.

Проведение процедуры

Алгоритм определения группы крови с помощью цоликлонов состоит в следующем.

Вначале у пациента проводится забор кровеносной массы для проведения исследования. Обычно это делается с помощью одноразового пяти кубового шприца. Затем проводят такие манипуляции:

  • на планшет для процедуры наносят по крупной капле цоликлонов каждой категории,
  • предварительно важно маркером точно подписать, в какую часть планшета какие реагенты нанесены,
  • рядом ставят каплю небольшого объема взятой на исследование кровеносной жидкости,
  • на проявление результата отводится 2-3 минуты.
Проведение процедуры

Чтобы проанализировать результат, в течение нескольких минут приводится помешивание реагентов с биоматериалом разными палочками. Лаборант внимательно наблюдает за реакцией агглютинации.

Читайте также:  Заболевания диафрагмы. Уплощение диафрагмы при эмфиземе

Положительной считается реакция в случае, если агглютинация (склеивание) состоялось. Агглютинаты представляют собой небольшие склеенные агрегаты красного цвета и мягкой природы. Если реакция отрицательная, склеивания не происходит, а кровеносная жидкость остается равномерной по структуре, ровного красного цвета.

Внимание! Определение группы крови по цоликлонам – достоверный метод, чтобы узнать свою группу и резус фактор. Стандартный набор процедуры включает лишь несколько манипуляций, требует немного времени и считается малозатратным способом. Схема проведения процедуры всегда одинакова. Чтобы точно узнать свою группу, манипуляции должен проводить только квалифицированный специалист.

Определение группы крови: цоликлоны, стандартные сыворотки и перекрестный способ

Определение группы крови и резус-фактора делятся на два способа:

Экспресс-диагностика (первичное определение группы крови и Rh-фактора) не учитывает антигены Келл, не говоря уже про другие системы верификации. Поэтому цоликлоны применяют только для первичного определения группы крови и резус-фактора и при экстренных показаниях трансфузии компонентов крови.

Подробнее о самой редкой группе крови в Мире можно найти здесь.

Определение группы крови и резус-фактора цоликлонами анти-А, анти-В и Анти-D супер является наиболее современным и относительно простым методом. Для определения группы крови используются цоликлоны, т.е. моноклональные антитела.

Что требуется для определения группы крови и резус-фактора?

цоликлон анти-А;

цоликлон анти-В;

цоликлон анти-D;

Определение группы крови: цоликлоны, стандартные сыворотки и перекрестный способ

– раствор натрия хлорида 0,9 %; специальный планшет; стерильные палочки.

Методика проведения реакции со стандартными эритроцитами

  1. Кровь для исследования берут из вены в пробирку, центрифугируют или оставляют на 30 мин для получения сыворотки.
  2. На маркированную тарелку наносят три больших капли (0,1 мл) сыворотки крови из пробирки, а рядом с ними по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов групп.
  3. Соответствующие капли смешивают стеклянными палочками, планшет покачивают, наблюдают в течение 5 мин, в капли с агглютинацией добавляют NaCl 0,9% и оценивают результат.

Оценка результатов проведения реакции со стандартными эритроцитами

Оценивают результаты, полученные со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и стандартными эритроцитами. Особенность результатов реакции со стандартными эритроцитами — эритроциты группы 0 (I) считают контрольными.

Результат перекрёстного способа считают достоверным, если при  реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и со стандартными эритроцитами ответы о группе исследуемой крови совпадают.

Если этого не происходит, обе реакции следует переделать.

Комплект поставки

Комплектность поставки должна соответствовать таблице 2.

Таблица 2 – комплект поставки

Наименование Обозначение документа Варианты исполнения (белый, прозрачный)
5 лунок 30 лунок 100 лунок
1. Планшет для типирования крови человека по антигенам эритроцитов ТУ −001− 06125010−2017 1 комплект 1 комплект 1 комплект
Эксплуатационная документация
2. Руководство по эксплуатации РЭ 1 шт. 1 шт. 1 шт.

Примечание: количество изделий (планшетов) в одном комплекте поставки может быть следующим.

  • Для варианта исполнения 5 лунок: 5 штук в одной упаковке, 50 штук в одной упаковке, 100 штук в одной упаковке.
  • Для варианта исполнения 30 лунок: 5 штук в одной упаковке, 50 штук в одной упаковке, 100 штук в одной упаковке.
  • Для варианта исполнения 100 лунок: 5 штук в одной упаковке, 50 штук в одной упаковке, 100 штук в одной упаковке.

Определение группы крови цоликлонами: алгоритм действий, резус-фактора, как с помощью, таблица

Определение группы крови цоликлонами делают беременным женщинам перед родами, больным людям — до проведения хирургической операции, и когда может понадобиться переливание крови. Есть и другие способы с применением различных веществ, но этот метод самый точный и применяется чаще всего.

Как проводится исследование

Алгоритм определения группы крови цоликлонами состоит в следующем. Лабораторное тестирование осуществляется при помощи 3 видов этих веществ:

  • «Анти-A» красного цвета, такой же оттенок имеет бутыль, крышка и этикетка препарата.
  • «Анти-B» имеет синий цвет, а также крышку, бутыль и этикетку, окрашенные в синий тон.
  • «Анти-D» — бесцветный и находится в прозрачной бутылке.
Определение группы крови цоликлонами: алгоритм действий, резус-фактора, как с помощью, таблица

При определении резус-фактора цоликлонами нельзя применять некачественные реагенты. Если флакон имеет дефекты или внутри жидкости есть осадок, то реагент потеряет свое действие.

Читайте также:  Высокое положение купола диафрагмы – причины, симптомы и лечение

Чтобы определить группу, медицинский работник наносит цоликлоны на лабораторную пластину, выполненную в виде таблицы. Наносятся реагенты разных типов (A, B и D). Каждый образец подписывается.

Цоликлон наносят на отмеченный участок. Каждый вид реагента берут своей пипеткой.

Рядом с сывороткой капают по 1 капле крови человека, затем чистой палочкой ее размешивают с реагентами. Через несколько секунд начнется реакция. Лаборант проводит наблюдение за реагентами 3 минуты. Потом можно расшифровывать результат анализа.

Что такое резус-конфликт

Резус-фактор — это антиген (белок), который находится на поверхности красных кровяных телец (эритроцитов). Ученым удалось обнаружить его 35 лет назад.

Их открытие помогло определить, что около 85% людей имеют этот самый резус-фактор и соответственно являются резус-положительными. Остальные же 15%, у которых его нет, — резус-отрицательны.

Обычно отрицательный резус-фактор никаких неприятностей своему хозяину не приносит. Однако если речь идет о беременной, все обстоит иначе

И будущей маме требуется особое внимание и уход

Чтобы понять причины этого, представьте себе пару, в которой мужчина резус-положительный, а женщина резус-отрицательна. Теоретически возникает опасность резус-конфликта.

Развитие конфликта возможно и в том случае, если кровь мамы и малыша несовместима по группе. Например, у матери группа крови 0, а у ее малыша — А или В.

Однако групповая несовместимость менее опасна и не предвещает таких осложнений, как несовместимость по резусу. В чем же суть конфликта? Резус-фактор плода преодолевает плацентарный барьер и попадает в кровь матери.

При последующих беременностях вероятность возникновения проблем повышается. Ведь в крови рожавшей женщины все еще живут защитные антитела («клетки памяти»), оставшиеся от прежней беременности.

Правильно лечение или меры профилактики может назначить только квалифицированный специалист. В некоторых случаях приходится прибегать к раннему родоразрешению (к родам раньше ожидаемого срока) и к уже описанному нами обменному переливанию крови новорожденному.

В наше время развитие резус-конфликта можно предотвратить и путем введения специальной вакцины — антирезус-иммуноглобулина — сразу после первых родов или прерванной беременности.

Если резус-антитела не вводились профилактически, это делают и во время беременности. Вы должны знать и о том, что сейчас стало обычной практикой делать такую прививку каждой резус-отрицательной женщине вскоре (до 72 часов) после родов или выкидыша в первую беременность.

Введение иммуноглобулина назначают также после оперативного вмешательства при внематочной беременности. Достижения современной и, в частности, нашей отечественной медицины вселяют все больше надежды и оставляют все меньше шансов для возникновения проблем, связанных с несовместимостью по резус-фактору.

Так что, если врач, взглянув на результаты ваших анализов, произнес: «Резус отрицательный», — не спешите расстраиваться. Если вы бдительная и ответственная мама и постараетесь соблюдать все необходимые предписания врачей, с вашим карапузом все будет хорошо.

Реже гемолитическая болезнь новорожденного вызывается групповой несовместимостью крови матери и плода (по системе АВ0). При этом за счет агглютиногена (А или В), имеющегося в эритроцитах плода, но отсутствующего у матери, в материнской крови происходит образование антител к эритроцитам плода.

Группа крови
Отец Мать Ребенок Вероятность конфликта
0(1) 0(1) 0(1) нет
0(1) A(2) 0(1) или A(2) нет
0(1) B(3) 0(1) или B(3) нет
0(1) AB(4) A(2) или B(3) нет
A(2) 0(1) 0(1) или A(2) 50%
A(2) A(2) 0(1) или A(2) нет
A(2) B(3) любая 25%
A(2) AB(4) A(2), АВ(3) или AB(4) нет
B(3) 0(1) 0(1) или B(3) 50%
B(3) A(2) любая 50%
B(3) B(3) 0(1) или B(3) нет
B(3) AB(4) А(2), B(3) или AB(4) нет
AB(4) 0(1) A(2) или B(3) 100%
AB(4) A(2) A(2), В(3) или AB(4) 66%
AB(4) B(3) А(2), B(3) или AB(4) 33%
AB(4) AB(4) A(2), B(3) или AB(4) нет